Данный
продукт рекомендован для исследовательских целей.
Назначение
Продукт используется
для оптимизации базовых рецептур сред, предназначенных для поддерживающего культивирования
клеток нервной ткани центральной и периферической нервной системы. Отмечена эффективность
Добавки В-27 в процессах длительного культивирования нейронов гиппокампа и
ретинальных ганглиев. Область применения: нейробиология, биомедицинские
исследования.
Рекомендуемая основа среды
для оптимизации: Нейробазальная (Neurobasal™ Medium).
Основные характеристики изделия
Не
содержит сыворотки. Содержит витамины, антиоксиданты, гормоны, липиды,
альбумин, инсулин, трансферрин.
Поддерживаемые культуры клеток
нейронального происхождения:
- Эмбриональные и
пренатальные нейробласты и прогениторы;
- Нейроны нервной ткани
взрослого человека;
- Первичные культуры
опухолевых клеток и постоянные клеточные линии опухолевых тканей нервной
системы;
- Эмбриональные нейроны
полосатого тела и среднего мозга крысы (EGF-стимулированная прогрессия
роста).
Протокол применения
Одного
флакона продукта (10 мл) достаточно для сапплементации 500 мл
оптимизируемой среды. Перед использованием, продукт размораживают в течение
ночи при 4° С.
Описанная процедура
тестирования была применена с целью культивирования нейронов гиппокампа и коры
мозга 18-дневного эмбриона крысы, а также клеточных линий нейробластомы.
- Покрыть поверхность
культуральной емкости адгезивом: стерильный водный раствор поли-D-лизина 0,05 мг/мл из
расчета 0,15 мл/см2 (выдержать 1 час при комнатной
температуре).
- Удалить раствор адгезива и
дважды ополоснуть поверхность стерильной деионизованной водой. Полностью
подсушить емкости в ламинарном шкафу. Использовать сразу или хранить в
холодильнике до 2 недель.
- Изолировать первичные
нейроны крысы или использовать культуру замороженных нейронов согласно
стандартным лабораторным протоколам.
- Осуществить пассаж клеток
в преинкубированной или прогретой при 37° С полной среде Нейробазальная.
Рекомендуемая плотность пассажа ~160 кл./см2. (Для нейронов
гиппокампа используется полная среда с добавлением 25 мкМ L-Глутамата).
- Инкубировать сосуды 37°
С в стандартных условиях СО2-инкубатора, однако,
предпочтительно снижение парциального содержания кислорода до 9% .
- Через 4-24 часа заменить ½
среды свежей.
- В случае негиппокампальной
культуры нейронов: через 4 дня после пассажа заменить ½ среды свежей. Для
гиппокампальной культуры нейронов: через 3 дня после пассажа заменить ½ среды
свежей без L-глутамата.
С периодичностью в 3 дня повторять процедуру. (Введение 25 мкМ
2-меркаптоэтанола увеличивает выживаемость и сроки культивирования
нейронов гиппокампа in vitro).
Срок
годности 2 года.
Условия
хранения и транспортировки:
Хранить
при температуре -10…-20° С в защищенном от света месте. Транспортировать с
использованием морозильного оборудования или термоконтейнера.
|
