Среда КриоМед-П на основе ДМСО, 100 мл, Евро-ПЭТ

Среда КриоМед-П

Предназначена для суспензионного замораживания и хранения культивируемых клеток. Не содержит сыворотки и органических компонентов неопределенного состава. Имеет сбалансированный ионный состав.

Данный продукт предназначен для исследовательских целей

Инструкция по применению

1. Взять культуру с плотностью монослоя 70-80% (для клеток прикрепляемых культур), или 50-70% плотности суспензии (для клеток суспензионных культур).
2. Снять клетки прикрепляемых культур с субстрата при помощи диссоциирующего раствора Трипсин-ЭДТА 0,05% в течение 5 минут при 37^оС (предварительно ополоснуть монослой клеток изотоническим раствором, не содержащим ионов Ca²⁺и Mg²⁺). Клетки суспензионных культур пипетировать и собрать в центрифужной пробирке.
3. Инактивировать трипсин при помощи: среды, содержащей 2-10% сыворотки (для сывороточных культур) или рабочего раствора ингибитора трипсина из плодов сои (0,2 мг/мл) – (для бессывороточных или сывороточных культур).
4. Осадить клетки, центрифугируя при 1000 об/мин 5-7 минут. Удалить супернатант, не затрагивая клеточный осадок.
5. Ресуспендировать клетки в среде «КриоМед-П» из расчета 0,5-2,0 млн/мл.
6. Разлить приготовленную криосуспензию по криопробиркам, герметично укупорить замораживаемые образцы.
7. Поместить замораживаемые образцы в специальный криоконтейнер с крышкой, можно в бокс из пенопласта и поместить его для медленного охлаждения в морозильник (-20 °С) в течение 1 часа.
8. Перенести бокс с образцами в морозильник глубокой заморозки (-70 °С) на 8-12 часов.
9. Быстро перенести образцы в жидкий азот (-197 °С) для длительного хранения.

Размораживание клеток:

1. Полностью разморозить содержимое криопробирок при 37 °С.
2. Мягко ресуспендировать клетки и однократно отмыть в среде культивирования или изотоническом растворе (1мл криообразца на 4мл среды, раствора), центрифугировать при 1000 об/мин 5-7 минут.
3. Ресуспендировать клетки в среде культивирования и посадить в культуральном флаконе 25 см².
4. При необходимости, перед пассажем оценивают количество жизнеспособных клеток в посевном материале при помощи окрашивания трипановым-синим.
5. Для максимального удаления ДМСО рекомендуется произвести полную замену среды через 1 сутки после начала культивирования клеток.
6. При работе с крупными, дифференцированными или чувствительными к механическим воздействиям клетками, этап отмывки может быть опущен. Однако, необходима полная замена среды через 1 сутки.

Срок годности:1 год

Условия хранения и транспортировки:

Хранить при температуре 2 - 8 °С в защищенном от света месте.

Транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре 2- 8 °С.